葉綠素儀與浸提法測定玉米葉綠素含量的比較
葉綠素儀與浸提法測定玉米葉綠素含量的比較
對葉綠素的研究一直是人們極其關注的課題。葉綠素含量測定方法主要有分光光度法和活體葉綠素儀法兩大類,后來又發展了光聲光譜法。但是,用手持葉綠素儀或光譜分析儀測得的是色素相對含量指標,并且不同種類植物葉片中的色素指標與實際葉綠素含量之間的關系方程式不同,即不能用一種關系來轉換不同植物的色素含量。在日常實驗中普遍采用分光光度法,用的較多的是Arnon法。Arnon法需要把植物材料研磨,經過過濾或離心長,在操除渣、移液、定容、比色等過程,工作量大,提取時間作過程中誤差較大,且易受光氧化的破壞,不適于對田間大量樣品的測定和大量葉綠素的提取,并且也不適合大批量樣本的應急檢測。后來又提出了丙酮乙醇混合液浸提法,證明利用混合液進行葉綠素浸提的可行性。進一步研究后發現,混合液法比傳統Arnon法提取葉綠素效率高,穩定性好。
選材：剪取葉片,洗凈后棄除葉柄和中脈,然后用紗布或吸水紙將葉片表面的水分吸干。為了試驗的精確度更高,我們在取樣時僅取每片葉的中間部位,并用SPAD-502測定其葉綠素相對含量值,使其偏差保持在(-5,+5)之間,超出范圍者棄掉。把挑選的葉片剪成小于2mm碎條,混勻。分兩份,一份在室溫(25℃)下,立即用研磨法(80%丙酮,95%乙醇)和直接浸提法(8種提取液)提取葉綠素;另一份每次用千分之一天平精準稱取(200 mg,稱取24份;1 g,稱取6份),分別裝袋,密封好,儲放到冰箱中備用。為增加不同測定方法之間可比性,樣品在冷凍前稱量分裝好。
浸提法:分別于容量瓶中加入15mL提取液,把葉片剪成寬度小于2mm的細絲或小塊,混勻,分別準確稱取200mg放入盛有提取液的容量瓶中,封口,置于黑暗條件下直接浸提。研磨法每個處理重復3次。室溫試驗時,按8種提取液分8組,每組12個50mL的容量瓶,分別按照上述方法加入葉片和各浸提液,并計時,在室溫黑暗條件下直接浸提葉綠素,并不時搖動。分別于10h、13h、16h和48h時,每組各取出3個容量瓶,定容至50mL后在645nm和663nm波長下測定吸光度值。取出冷凍20h的葉片按照如上方法和程序或研磨或浸提。每個處理3個重復,浸提在50℃水浴中進行,用肉眼觀察葉組織完全變白,即說明浸提完全,取出冷卻后定容,在645 nm和663 nm波長下測定吸光度值。
葉綠素儀：現在市面上最流行的莫過于SPAD502。SPAD502是有日本柯尼卡美能達研制生產的，SPAD502通過測量葉子對兩個波長段里的吸收率，來評估當前葉子中的葉綠素的相對含量。該儀器擁有小巧的機身，僅200g的重量，可以方便地裝入口袋并帶到現場進行測量，因此又叫做手持葉綠素儀。葉綠素儀操作也非常方便，你只需將葉片插入并合上測量探頭即可，無需將葉片剪下，這樣就可以在作物的生長過程中全程對特定的葉片進行監測，從而得到更科學的分析結果。因此，葉綠素能夠對葉片進行無損測定，保護了葉片本身。
這兩種方法各有優勢，浸提法提取時受很多試劑的影響，因此在使用試劑時一定要謹慎，另外，浸提法測定時如果采用冷凍處理，可以縮短浸提時間，但是其測定值會變低。而用SPAD502測定則操作簡單，結果精確，但是該儀器價格昂貴。因此我們要根據實際需求，來選擇測定方法。
