如何檢測人工栽培中藥材的農藥殘留
來源： http://www.jetlicn.com/ 類別：實用技術 更新時間：2013-01-29 閱讀次
【本資訊由中國糧油儀器網提供】 近年來，隨著中藥材的需求量擴大，天然的中藥材已不能滿足市場供給需求，目前大部分中藥材依賴人工栽培。為提高種植中藥材產量，藥農按照種植農作物的方法頻繁使用農藥。為此，世界衛生組織曾在制定植物藥的一般檢驗方法和質量標準時提出農藥殘留量測定的問題。目前，農藥殘留量的檢測方法主要有氣相色譜法、氣相色譜－質譜聯用法、高效液相色譜法、液相色譜－質譜聯用法和薄層色譜法及農藥殘留速測儀法等。農藥殘留中的有機磷類農藥分子量較小，易氣化，適合于氣相色譜測定。本研究采用乙腈為提取溶劑，樣品濃縮干燥后經石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯固相萃取柱提純，丙酮定容，通過DB－7毛細管柱和FPD檢測器進行氣相色譜定性和定量。樣品預處理步驟簡單，具有較高的靈敏度、準確度和精密度，適合在基層單位推廣使用。
將裝有農藥標準品敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果、樂果、氯唑啉、毒死蜱、水胺硫磷、三唑磷、殺撲磷的安瓿瓶從冰箱中取出，室溫放置15min后打開，分別吸取0.5mL置于50mL容量瓶中，丙酮定容至刻度，配成濃度均為1.0μg/mL的有機磷類混合標準使用溶液，待用。取供試品，粉碎，過二號篩，取約5.0g(準確至0.01g)于50mL具塞離心管中，加入乙腈30mL，超聲提取30min，離心，取上清液，過無水硫酸鈉脫水，脫水后的溶液收集于100mL平底燒瓶中；沉淀物加入乙腈20mL超聲，離心，脫水，液體合并于平底燒瓶中，45℃水浴減壓濃縮近干，待下一步凈化。用丙酮：二氯甲烷(1∶1)的混合溶液5mL預淋洗石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯固相萃取柱，棄去淋洗液，平底燒瓶中的濃縮提取物用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液洗滌3次，每次1mL，洗液過石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯固相萃取柱，液面到達石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯固相萃取柱表面后再用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液12mL洗脫，收集此洗脫液15mL于50mL平底燒瓶中，濃縮近干，加入丙酮1mL溶解并定容，旋渦混勻，樣品上氣相色譜進行分析。色譜條件：色譜柱：DB－17毛細管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm，Agilent公司)；載氣：氮氣，純度≥99.999%；進樣口溫度：250℃；進樣方式：不分流進樣；FPD檢測器；檢測器溫度：270℃；柱溫：采用程序升溫，初始溫度70℃(保持2min)，以每分鐘25℃升至150℃(保持0min)，以每分鐘3℃升至200℃(保持0min)，以每分鐘8℃升溫至230℃(保持5min)；進樣量為1.0μL。有機磷標準曲線的制作準確吸取1.0、3.0、5.0、7.0mL的有機磷類混合標準使用溶液置于10mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度混勻，有機磷類混合標準系列濃度分別為0.10、0.30、0.50、0.70μg/mL，1.0μg/mL直接測定使用液。取1.0μL各濃度標準溶液進行氣相色譜測定，以不同有機磷農藥出峰的保留時間定性，峰面積定量。以每種有機磷農藥的不同濃度所對應的峰面積繪制10種有機磷農藥的標準曲線。
根據10種有機磷農藥的標準色譜圖各組分的保留時間定性，外標法定量。10種有機磷農藥的標準色譜圖。將5個濃度標準系列的混合標準溶液分別上機分析，以各有機磷農藥的峰面積對濃度做標準曲線，以3倍信噪比計算各農藥的檢出限(LOD)，以10倍的信噪比計算各農藥的定量限(LOQ)。線性方程、相關系數、最低檢出限和最低定量限。在0.10～1.0μg/mL的濃度范圍內呈良好的線性關系。方法的最低檢出限為0.0058～0.060mg/kg，其中6種有機磷殘留物的檢測限＜0.010mg/kg，符合多殘留檢測要求。最低定量限為0.019～0.20mg/kg。
在相同的色譜條件下，對已制備的大黃、甘草、黨參、黃芪、枸杞子5種中藥材進行有機磷農藥殘留加標回收測定，混合標準溶液添加量為0.5mg/kg，平行測定6次，樣品加標回收率和精密度試驗。10種有機磷農藥加標回收率在67.1%～120.0%之間，相對標準偏差(RSD)＜6.0%，該檢測方法符合多種農藥殘留量的要求。
農藥殘留的提取是農藥殘留檢測中很關鍵的一步，“常用的提取劑有丙酮、乙酸乙酯、乙腈”。丙酮作為極性較強并與水相溶的提取溶劑，能溶解多數農藥，且過濾和溶解都很容易，但丙酮又能大量提取植物組織中的油脂和色素，為下一步凈化帶來困難。乙酸乙酯萃取脂溶性物質，提取機磷類農藥的能力較差。乙腈極性較大，分子小，作為提取溶劑，可有效減少中藥材中含有的色素或脂肪等成分對后續的凈化分析帶來的影響，被美國分析化學家協會(AOAC法)所采用，也是我國目前常用的提取溶劑，適合有機磷類農藥的提取，且操作簡單，在有機磷農殘測定中是首選提取溶劑。
針對有機磷農藥測定特點，國內外推薦3種凈化方式：C18固相萃取、單一石墨化碳(CARB)固相萃取和氨基(NH2)固相萃取、石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯固相萃取”。在有機磷農藥樣品凈化的過程中，C18固相萃取主要去除部分脂溶性色素和油脂類成分，采用單一的石墨化碳(CARB)固相萃取柱可除去色素，但對植物脂肪無法除去，石墨化碳(CARB)固相萃取柱和氨基(NH2)固相萃取柱分開使用，增加樣品凈化操作步驟。石墨化碳(CARB)固相萃取柱/氨基(NH2)串聯固相萃取可有效去除色素、植物脂肪、蛋白等雜質，樣品凈化效率較高且減少凈化步驟，目前在有機磷農殘測定的樣品凈化中作為首選方法。
將裝有農藥標準品敵敵畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、氧化樂果、樂果、氯唑啉、毒死蜱、水胺硫磷、三唑磷、殺撲磷的安瓿瓶從冰箱中取出，室溫放置15min后打開，分別吸取0.5mL置于50mL容量瓶中，丙酮定容至刻度，配成濃度均為1.0μg/mL的有機磷類混合標準使用溶液，待用。取供試品，粉碎，過二號篩，取約5.0g(準確至0.01g)于50mL具塞離心管中，加入乙腈30mL，超聲提取30min，離心，取上清液，過無水硫酸鈉脫水，脫水后的溶液收集于100mL平底燒瓶中；沉淀物加入乙腈20mL超聲，離心，脫水，液體合并于平底燒瓶中，45℃水浴減壓濃縮近干，待下一步凈化。用丙酮：二氯甲烷(1∶1)的混合溶液5mL預淋洗石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯固相萃取柱，棄去淋洗液，平底燒瓶中的濃縮提取物用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液洗滌3次，每次1mL，洗液過石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯固相萃取柱，液面到達石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯固相萃取柱表面后再用丙酮：二氯甲烷(1∶1)混合溶液12mL洗脫，收集此洗脫液15mL于50mL平底燒瓶中，濃縮近干，加入丙酮1mL溶解并定容，旋渦混勻，樣品上氣相色譜進行分析。色譜條件：色譜柱：DB－17毛細管色譜柱(30m×0.32mm×0.25μm，Agilent公司)；載氣：氮氣，純度≥99.999%；進樣口溫度：250℃；進樣方式：不分流進樣；FPD檢測器；檢測器溫度：270℃；柱溫：采用程序升溫，初始溫度70℃(保持2min)，以每分鐘25℃升至150℃(保持0min)，以每分鐘3℃升至200℃(保持0min)，以每分鐘8℃升溫至230℃(保持5min)；進樣量為1.0μL。有機磷標準曲線的制作準確吸取1.0、3.0、5.0、7.0mL的有機磷類混合標準使用溶液置于10mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度混勻，有機磷類混合標準系列濃度分別為0.10、0.30、0.50、0.70μg/mL，1.0μg/mL直接測定使用液。取1.0μL各濃度標準溶液進行氣相色譜測定，以不同有機磷農藥出峰的保留時間定性，峰面積定量。以每種有機磷農藥的不同濃度所對應的峰面積繪制10種有機磷農藥的標準曲線。
根據10種有機磷農藥的標準色譜圖各組分的保留時間定性，外標法定量。10種有機磷農藥的標準色譜圖。將5個濃度標準系列的混合標準溶液分別上機分析，以各有機磷農藥的峰面積對濃度做標準曲線，以3倍信噪比計算各農藥的檢出限(LOD)，以10倍的信噪比計算各農藥的定量限(LOQ)。線性方程、相關系數、最低檢出限和最低定量限。在0.10～1.0μg/mL的濃度范圍內呈良好的線性關系。方法的最低檢出限為0.0058～0.060mg/kg，其中6種有機磷殘留物的檢測限＜0.010mg/kg，符合多殘留檢測要求。最低定量限為0.019～0.20mg/kg。
在相同的色譜條件下，對已制備的大黃、甘草、黨參、黃芪、枸杞子5種中藥材進行有機磷農藥殘留加標回收測定，混合標準溶液添加量為0.5mg/kg，平行測定6次，樣品加標回收率和精密度試驗。10種有機磷農藥加標回收率在67.1%～120.0%之間，相對標準偏差(RSD)＜6.0%，該檢測方法符合多種農藥殘留量的要求。
農藥殘留的提取是農藥殘留檢測中很關鍵的一步，“常用的提取劑有丙酮、乙酸乙酯、乙腈”。丙酮作為極性較強并與水相溶的提取溶劑，能溶解多數農藥，且過濾和溶解都很容易，但丙酮又能大量提取植物組織中的油脂和色素，為下一步凈化帶來困難。乙酸乙酯萃取脂溶性物質，提取機磷類農藥的能力較差。乙腈極性較大，分子小，作為提取溶劑，可有效減少中藥材中含有的色素或脂肪等成分對后續的凈化分析帶來的影響，被美國分析化學家協會(AOAC法)所采用，也是我國目前常用的提取溶劑，適合有機磷類農藥的提取，且操作簡單，在有機磷農殘測定中是首選提取溶劑。
針對有機磷農藥測定特點，國內外推薦3種凈化方式：C18固相萃取、單一石墨化碳(CARB)固相萃取和氨基(NH2)固相萃取、石墨化碳(CARB)/氨基(NH2)串聯固相萃取”。在有機磷農藥樣品凈化的過程中，C18固相萃取主要去除部分脂溶性色素和油脂類成分，采用單一的石墨化碳(CARB)固相萃取柱可除去色素，但對植物脂肪無法除去，石墨化碳(CARB)固相萃取柱和氨基(NH2)固相萃取柱分開使用，增加樣品凈化操作步驟。石墨化碳(CARB)固相萃取柱/氨基(NH2)串聯固相萃取可有效去除色素、植物脂肪、蛋白等雜質，樣品凈化效率較高且減少凈化步驟，目前在有機磷農殘測定的樣品凈化中作為首選方法。
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